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细胞增殖检测

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应用MTT、CCK-8比色法,检测细胞存活和生长。MTT检测原理为活细胞内线粒体中的琥珀酸脱氢酶能催化外源无色的MTT形成蓝色的结晶Formazan,并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的Formazan,用酶联免疫检测仪在一定波长处测定其吸光值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。CCK-8原理与MTT类似,其灵敏度更高,而且孵育后可以直接上机检测,不需要DMSO溶解,操作更方便。

1.细胞接种:收到客户细胞后,我们会用细胞计数板对细胞进行计数,得出细胞悬液浓度。计算出应稀释的倍数,按MTT或CCK-8试剂盒要求在96孔板内接种相应浓度的细胞悬液;

2.细胞培养:然后在无菌恒温细胞培养箱内培养接种好的96孔细胞培养板,并实时观察细胞状态;

3.药物处理并呈色:按不同浓度梯度加入药物作用细胞;

4.溶解、比色:加入MTT或CCK-8,按操作要求孵育相应时间,在酶标仪内检测对照组和实验组的吸光值。并处理数据得出比色结果。(CCK-8孵育后可直接比色,MTT需要加DMSO溶解紫色晶体)

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