目的 探讨微RNA （microRNA，miRNA或miR） -887-3p对大鼠椎间盘纤维环细胞增殖和凋亡的影响及其 潜在的分子机制。

方法 取8周龄SPF级雄性SD大鼠的纤维环组织，离心制备并鉴定纤维环细胞。实验随机分为4 组：正常组 （Normal group） 是不做任何处理的原代纤维环细胞；对照组 （Control group） 用10 ng/mL白细胞介 素-1β （interleukin-1β，IL-1β） 处理纤维环细胞24 h，形成退变细胞模型；干扰组 （miR-887-3p inhibitor） 是在对 照组的基础上用 Lipo3000 转染 miR-887-3p 抑制子；过表达组 （miR-887-3p mimics） 是在对照组的基础上用 Lipo3000转染miR-887-3p模拟物。采用CCK-8法检测各组细胞活力；流式细胞术检测各组细胞凋亡率；实时荧光 定量PCR法检测miR-887-3p和鼠双微体4 （murine double minute 4，MDM4） mRNA的表达；蛋白质印迹法检测 MDM4、Bcl-2和Caspase-3的蛋白表达水平。

结果 免疫荧光染色法鉴定分离培养的细胞发现，大鼠椎间盘纤维 环细胞中Collagen I的阳性率在90%以上，提示纤维环细胞纯度大于90%。实时荧光定量PCR结果显示，利用IL- 1β 构建纤维环退变细胞模型后，miR-887-3p 表达水平与正常组相比显著上升 （P<0.001）；与对照组相比，转染 miR-887-3p抑制子后，miR-887-3p表达水平显著下降 （P<0.001）。CCK-8法检测结果表明，与正常组相比，对照组 细胞活力显著下降 （P<0.001）；与对照组相比，抑制miR-887-3p的表达后，细胞增殖能力显著增强；miR-887-3p 过 表 达 后，细 胞 增 殖 能 力 显 著 下 降。流 式 细 胞 仪 检 测 结 果 表 明，与 正 常 组 相 比，对 照 组 的 细 胞 凋 亡 率 显 著 增 加 （P<0.001）；与对照组相比，miR-887-3p干扰组的细胞凋亡率显著降低 （P<0.001），miR-887-3p过表达组 的细胞凋亡率显著增加 （P<0.001）。蛋白质印迹法检测结果发现，与正常组相比，对照组中Bcl-2的表达水平显著 降低 （P<0.001），Caspase-3的表达水平显著升高 （P<0.001）；与对照组相比，miR-887-3p干扰组中Bcl-2和MDM4 表达水平显著升高 （P<0.01），Caspase-3的表达水平显著降低 （P<0.01）；而miR-887-3p过表达组中Bcl-2和MDM4 表达水平显著降低 （P<0.05），Caspase-3的表达水平显著升高 （P<0.05）。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹结果 显示，干扰 miR-887-3p 后，MDM4 蛋白和 mRNA 的表达增加 （P<0.001）；过表达 miR-887-3p 后，MDM4 蛋白和 mRNA的表达降低 （P<0.01，P<0.001）。

结论 miR-887-3p可能通过调控MDM4的表达来影响大鼠椎间盘纤维环 细胞的增殖和凋亡，进而影响椎间盘退变的发生和发展。

阅读原文：微RNA-887-3p能抑制大鼠椎间盘纤维环细胞中MDM4表达和细胞增殖并促进细胞凋亡.pdf