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实验动物病理取材步骤以及注意事项,附不同脏器取材细节

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在病理实验中,对不同部位的组织进行取材是实验顺利进行的首要步骤,也是获取有效数据的关键。接下来,我们将详细了解病理实验动物取材的步骤及注意事项。

01、取材前准备
需要准备的取材用具:动物固定板、外科手术刀、镊子、解剖剪刀、滤纸纱布、固定容器、固定液以及实验记录本等。若需要对脏器进行称量或拍照,还需准备天平、尺子和标签。

所需的试剂有:麻醉剂、固定液和生理盐水。

废物存放要求:应使用有明显标志的黄色垃圾袋来存放动物尸体和废弃脏器,锐器盒则用于存放废弃的针头、刀片和注射器等。

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02、取材基本要求

动物麻醉及处死过程应迅速进行,这既符合动物伦理要求,也能避免动物组织死后自溶,从而影响实验结果的准确性。

在取材时,应对动物模型的外表和脏器进行肉眼观察,并做相应的实验记录。

取材人员应对所取样本有充分了解,取材过程要迅速。对于易自溶的组织,如肠道和腺体,应优先处理。

取材时使用的剪刀和刀片应保持锋利,镊子尽量避免使用齿镊,夹取脏器时应用无齿镊夹住其周围的结缔组织。

如无特殊要求,所选组织应尽量包含脏器的全部层次或重要结构。若相同器官需要多次取材,选材部位应尽量保持一致。

剖检应在设有解剖台的解剖室内进行,小动物可在大小适宜的搪瓷盘内进行。剖检完成后,应及时对用具和场地进行严格消毒,特别是处理死于传染病的动物尸体时,要严防病原扩散。

动物尸体应及时收入冰柜,并按照医疗垃圾的处理方法进行妥善处理。

*注:动物尸检时,常被忽视的体表检查也非常重要。例如,四肢水肿可能提示动物生前患有心脏、肝脏、肾脏或关节炎症等疾病;尾巴坏死可能是外伤(如夹伤、打斗等)或注射时损伤血管导致血液供应不足造成的;天然孔如口腔、鼻孔周围有血液,可能是食道或上呼吸道损伤;肛门周围污秽则可能提示动物生前有腹泻现象,多患有肠道疾病等。

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03、病理实验动物各脏器取材细节
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04、注意事项

1. 若发现肉眼可见的病变,应认真观察并准确选取病变部位的组织,切勿漏取,以确保全面反映组织病变的全貌。同时,需要由表及里地观察病变状况,测量重量、记录部位和体重等。

2. 根据实验方法、目的以及病变情况,应尽量多取材,并确保所选取的组织材料包含各脏器的主要结构部分。

3. 应避免选取因解剖失误造成的凝血块和坏死组织等。

4. 在取病理材料时,应避免压挤(以免组织变形)、刮抹(以免组织缺损)和冲洗(以免红细胞和其他细胞吸水肿胀破裂)。

5. 所取的材料应尽量保持肉眼标本的完整性,厚度不宜过厚或过薄。建议选用1.5cm×1.5cm×0.5cm的取材规格。

6. 在组织分离时,应注意钝性分离,避免用器械直接夹伤组织。如果脏器上附有血液、黏液等污物,应用生理盐水冲洗后再进行固定。如果血液过多导致固定液变色,应及时更换固定液。

7. 胃肠标本在取材前应将内容物冲洗干净。

8. 对于肝肾等较大的脏器,可以先将其切成较薄的块状组织进行固定,或者稍固定后再切成片状继续固定。

9. 对于垂体、肾上腺、甲状腺等小组织,应平铺于滤纸上再进行固定。

05、取材后病理分析注意事项

1)常规HE染色时,切片厚度应根据不同组织类型进行调整。

2)在光镜下观察时,应首先区分有无特异性病变及其范围,然后由脏器的一端向另一端进行整体观察和描述。

3)观察小动物脏器时,应注意有无肿大、增生等现象。可以使用10倍镜由一端开始计数该脏器包含的10倍镜镜头视野数,或计数整个切片中的功能单位数。

4)对于大动物的脏器,如果怀疑有肿大、增生等情况,可以使用40倍镜头计数每一视野中的细胞或功能单位数。

5)在确定病灶大小后,应使用40倍镜头进行观察。可以先将镜头的圆周与观察的病灶边缘相切,再观察该病灶在这一视野中的比例。

6)在计算实验动物肿瘤发生率时,不论肿瘤是良性还是恶性,均应计入肿瘤发生数,并计算肿瘤发生率。

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