循环血量
我们在做动物实验时,每个技术人员在掌握不同动物的采血方法的同时,应熟悉动物的总血量(尤其是循环血量),如此既能确保动物健康,又能在一定时间内可采集的血液量应限定在一定范围之内。 不同实验动物血液样本的采集量需依赖于其循环血量计算出参考数据。相同物种实验动物的循环血量也会因动物品种、性别以及采血方法等不同而表现出一定的差异,表1列出了药物安全评价试验中常见实验动物品种的循环血量平均值及范围。
采血量
在动物进行采血时应考虑动物福利问题因素,尤其是当采血量达到限值时,动物的生理变化会影响实验数据的解释和有效性,例如动物的活动量、心率、呼吸频率等等。但在短时间内,采血过量可能不会表现明显的临床症状。在毒性试验中,不推荐单次采血量超过循环血量的15%。另外如果采血速度过快会导致动物失血性休克,这时候建议改为少量多次采血,避免失血性休克最终死亡。表2列出了单次采集和多次采集不同比例循环血量后动物的建议恢复时间。
有些动物实验需要多次采血,例如毒代动力学或药代动力学试验,这类试验采血可能到循环血量的20%。但需要注意的是,采集大量血液会导致血液动力学变化,并可能影响药物半衰期的计算。通过补充血容量在一定程度上可以减缓失血过多,但却不能完全消除大量失血的影响,所以不建议在非治疗目的实验中实施此类操作。
不同于多次采血,实验结束后的终末血液样本采集往往会在动物实验结束后安乐死时实施,因此可以不考虑失血过多对后续健康的影响。根据表2的数据,为避免干扰实验动物生理参数,很容易制定出推荐的动物血液采集量,详见表3。随着血液分析技术及仪器设备的进步,更多的在尝试并使用微量采血及分析技术,极大地减少血液样本的采集量,进而也提升了被试实验动物的福利。
采血位点
一些因实验要求而必须采取的特殊位点血液样本采集,如舌下采集、截尾采集、眼球后采集和心脏采集等方法会导致动物产生较大的应激反应,建议在麻醉状态下对动物进行血液样本采集。部分试验需要对单只动物进行多次血液样本采集,为减轻采血操作对动物的影响,需依据不同的实验动物选择不同的采血位点,表4列出了不同品种动物的推荐血液样本采集位点。
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