一、实验材料
牛二型胶原(北京博蕾德技术发展有限公司,20022)
CFA (北京博蕾德技术发展有限公司,7008)
二、实验方法
1、将牛二型胶原溶于0.05M醋酸中,终浓度2-4mg/ml,温和搅拌,4℃过夜。
2、将牛二型胶原醋酸溶液与CFA等量混合并乳化,乳化使用高速搅拌器,冰浴搅拌CFA和胶原溶液,一般搅拌3次,30000rpm/3min。保证乳化液滴入水中成团不散开。
3、初次免疫:小鼠尾根注射0.1ml乳液。从尾根部2cm处插入针头,针尖距离尾根0.5cm注射。
4、二次免疫:第21天,小鼠尾根再次注射0.1ml乳液。从尾根部2cm处插入针头,针尖距离尾根0.5cm注射。
5、一般在二次免疫后7-12天,模型组小鼠80%以上会出现关节炎症状。根据小鼠关节红肿程度和活动状态进行临床评分。在实验前和实验后的第3、5、7、12天分别观察记录。
评分标准:
得分 | 发病情况 |
0 | 正常 |
1 | 脚部皮肤发红,无明显肿胀 |
2 | 轻度的踝关节、腕关节发红、肿胀 |
3 | 踝关节或腕关节中度发红肿胀 |
4 | 脚趾及关节红肿严重,强直或畸形 |