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克隆形成实验

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细胞克隆形成率即细胞接种存活率,表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率能够反应细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

1) 取对数生长期的细胞,分别用0.25%胰酶消化并吹打成单细胞状态;

2) 将细胞悬液作梯度倍数稀释,每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含培养基的培养皿中,轻轻转动,使细胞分散均匀。将培养皿置于37℃、5% CO2培养箱中培养2~3周(根据细胞种类和生长状况);

3) 经常观察,当培养皿中出现肉眼可见的克隆时,终止培养。弃去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定

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