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为什么要做预实验?国自然预实验数据占多少比例合适?

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科研项目的申请,就像是一场精心策划的冒险之旅,而预实验部分则是探险家的必备装备和详细地图。在国家自然科学基金的申请过程中,虽然预实验并没有固定的占比规定,但这并不意味着它不重要。相反,预实验是反映你的科学假设是否站得住脚、研究方法是否科学全面的重要依据。

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01 为什么要做预实验?

那么,为什么要做预实验?为什么必须要有前期相关结果?或许有些研究者并不明白其中的利害关系,因此并不太在意,从而疏忽了该部分的书写。下面我们来整理一下做预实验的相关原因:

1、确保研究的可行性

为了避免后续实验不能按照预期的计划完整开展,减少研究的风险,通常会在研究正式开始前,通过代价较小的预实验来确定一个可行的课题。此外,由于实验失败的机率往往大于成功的机率,通过多次预实验的结果可以预测实验成功的概率,从而及时止损。

2、把控实验药物的正确剂量

在疾病治疗的研究中,实验开始前最先需要获得的信息是药物的浓度。例如,当你想探究一个中药活性成分对肝癌的治疗作用时,你通常会查找其他文献来了解该活性成分在疾病治疗中的使用剂量。但是无论剂量为何,我们都需要通过预实验进行验证。除了与疾病组做对比,证明该药物具有一定的治疗效果外,还要测试药物的毒性剂量。

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3、体现前期研究的工作量

为什么预实验要有足够的体量呢?首先,专家意见反馈中常会见到“证据链不足”,这就是在说预实验结果不足,不能支撑研究假说。其次,丰富的预实验结果可以弥补本子撰写中的小问题,比如个别格式不标准、前言后语衔接不连贯、国内外现状缺少点逻辑等。最后,预实验多说明研究花费了很多经费,证明我们对待国家自然科学基金的态度是积极的。要相信专家能够看到我们的努力。

02 什么样的预实验是专家眼中有效的预实验?

举个例子来说明:

我们发现,经常熬夜容易变胖。那么,为什么经常熬夜会容易变胖呢?

通过查阅文献,我们发现已经有流行病学相关的研究证明,24小时轮班工作或者是经常性熬夜与肥胖之间具有密切的关联。迪米利亚等人对346名白天工作和轮班工作的人进行横向调查研究发现,轮班工作的人的平均体重指数明显高于白天工作的工人。此外,还有研究证明生物钟紊乱与肥胖和代谢紊乱具有高度的相关性,并且生物钟紊乱还可以引起下丘脑NPY的释放增加。

基于这些文献数据,我们提出可能的假说是:经常熬夜可以引起生物节律紊乱,通过影响下丘脑中NPY的释放,进而引起肝脏脂肪代谢的紊乱,最终导致肥胖。

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为了验证这个假说,我们需要做一些预实验。首先,我们会证明一下昼夜节律紊乱是否可以引起体重的增加,以及下丘脑NPY的释放是否可以引起肝脏脂肪三酯合成的增加。如果这两个预实验的结果都能和我们的预想一样,那就证明假设是很可能成立的。

我们比较了正常的小鼠和就业节律紊乱的小鼠的体重以及腹部脂肪,发现昼夜节律紊乱的小鼠的体重和腹部脂肪都是增加的。同时,我们对小鼠进行NPY的注射,发现注射NPY的小鼠和对照组相比,其甘油三酯浓度增加的幅度更大。通过计算甘油三酯分泌的速度,我们最后发现注射NPY的小鼠甘油三酯分泌的速率显著高于对照组。所以这两个预实验的结果就证明我们的假说是很可能存在的。

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03 国自然预实验数据应该占比多少比较合适?

最糟糕的是完全没有开展过实验,仅仅进行了生信分析、网络药理或者组学测序,这样看来就是欠缺了前期基础。

如果按照预实验数据能够支撑国家自然科学基金的科学假说的角度出发,大概有以下一些实验是有必要的:

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  • 临床激活水平检测:研究材料为临床来源的组织样本,最常见的检测手段是通过表达水平来判断A、B、C分子的激活水平。mRNA常见的检测手段有RNA-seq、qPCR、northernblot、FISH;蛋白水平常见的检测手段有ELISA、western blot、IHC、免疫荧光等。

  • 相关性表达分析:根据RNA-seq或者qPCR的结果分析基因之间的相关系数。

  • 细胞功能实验:可以分为小分子干预方式,或者对分子A、B、C或者通路X,进行过表达(overexpression)或者沉默(RNAi),甚至敲除(KO)干预,进行观察细胞的表型变化。也就是说,分为上调激活(gain of function)以及下调沉默(loss of function)的调控逻辑,检测细胞的表型改变(增殖,死亡,转移侵袭等)。

  • 动物实验:模拟疾病发生的在体环境,观察分子A、B、C或者通路X的干预对于疾病进展的影响,评估分子A、B、C或者通路X作为疾病治疗靶点的效果。


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此外,还有上下游作用关系的验证、分子互作、结构预测等。一般认为前期基础能够占整个研究的30~40%是比较合适的。例如,中药复方根据中医理论基础或者文献报道具有治疗某种疾病的效果。

而在我们的前期探索中,采用细胞实验或者动物实验也初步确定了药效确切,所以可以进一步展开机制探究。那么前面证明疗效的实验即是研究基础。以此为条件,需要更为深入地阐明机制的部分,可作为我们申请基金支持的依据。

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