溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis，UC）是一种慢性非特异性肠道炎症性疾病，其病因尚不明确，目前被世界卫生组织（WHO）列为“现代难治病”。西医对于本病的药物治疗手段主要为激素、免疫系统调节剂等，但长期服用对肝、肾毒性较大，并可导致机体免疫力低下。从中医的角度来看，UC属于“痢疾”“泄泻”“便血”等范畴，随着病情发展还会出现诸如由虚转实、由寒转热，或虚中夹实、寒热错杂等病机的转化。《溃疡性结肠炎中医诊疗专家共识意见（2017)》根据其复杂多样的病因病机对UC进行了辨证分型，针对不同证型UC的辨证论治更符合对该病的中医治疗策略。在与UC相关的动物实验研究中，最常用的化学造模诱导剂包括2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）和葡聚糖硫酸钠（DSS）。上述造模方式仅可建立动物的结肠炎症模型，但符合中医证候特点的UC动物模型建立方法的报道较少。

在现有与上述证型相关的研究中，多涉及湿热蕴结证、脾虚湿困证和肝郁脾虚证等，而对于寒热错杂证型UC模型的研究较少。“寒热错杂证”是一种机体同时出现寒象与热象的证候，寒热错杂型UC既常见于单独证型，又揭示了UC疾病本身的错综复杂，且UC的总病机与寒热错杂、气滞血瘀相关。对“寒热错杂型UC”这一重要分型的研究现状，限制了该分型UC的病因病机、中药药效和中医治疗手段的研究，故基于病证结合特点，细化寒热错杂型UC动物模型的相关操作，将有利于相关的辨病分析与辨证研究。

乌梅丸是《伤寒论》中治疗基本病机为“寒热错杂，上热下寒”厥阴病的中药方剂。有研究显示，乌梅丸对大承气汤与TNBS/乙醇混合液联合建立的寒热错杂型UC具有良好的治疗作用。从以方测证的角度反观，大承气汤与TNBS/乙醇联合可成功诱导寒热错杂证UC的产生，但上述模型研究中缺乏对“寒热错杂证”的实验评价指标研究，包括具体的造模周期、造模剂量等参数。因此，本研究拟以寒热错杂型UC的中医病证结合模型为研究对象，以相关客观寒/热指标和炎症指标为依据，在“虚寒证”基础上继续复制UC疾病模型，并对不同造模组的结果进行综合评价，优选寒热错杂型UC大鼠模型的最佳造模方案，进而为相关动物模型研究提供实验依据。

分组与造模

48只大鼠适应性饲养1周后，随机分为6组，包括空白组、大承气汤组及4个模型组（模型1～4组），每组8只。空白组全程给予氯化钠溶液（9 g/L）灌胃（10 mL/kg）。

根据文献方法制备大承气汤，即取酒大黄12 g、厚朴15 g（去皮）、炙枳实12 g、芒硝9 g，加10倍量水将除酒大黄外的饮片浸泡30 min，煎煮30 min后加入大黄继续煎煮10min，过滤；药渣再加5倍量水煎煮30 min，过滤，将两次药液合并后浓缩至1 g/mL（以大黄计）。本研究所用饮片均根据《中华人民共和国药典（2020年版）：一部》进行质量检查，均为合格饮片。

造模第1阶段（第1～10天）：除空白组给予氯化钠溶液（9 g/L）灌胃（10 mL/kg）外，其余各组给予大承气汤灌胃10 d(10 mL/kg）诱导虚寒证模型。大承气汤组10 d后禁食不禁水24 h，麻醉后进行腹主动脉取血，并取材；模型1～4组10 d后行UC造模。

造模第2阶段（第11～18天）：实验第11天，空白组大鼠正常进食、饮水，模型1～4组大鼠采用异氟烷吸入麻醉，将聚乙烯管顶端涂适量石蜡油，插至大鼠结肠内距肛门口约8 cm处；随后模型1～4组大鼠分别给予TNBS(70 mg/kg）与体积分数50%乙醇（1∶1）混合液、TNBS(50 mg/kg）与体积分数50%乙醇（1∶1）混合液、TNBS(70 mg/kg）与体积分数25%乙醇（1∶1）混合液、TNBS(50 mg/kg）与体积分数25%乙醇（1∶1）混合液缓慢灌肠。灌肠完毕后夹住大鼠肛门，将大鼠头朝下悬挂5 min，再平躺5 min，至其自然清醒后恢复自由进食、饮水。各组造模过程见图1。

在大承气汤诱导“虚寒证”模型的基础上，乙醇浓度对UC造模成功与否有较大影响。经实验研究比较可知，采用TNBS溶液（剂量70 mg/kg）与体积分数50%乙醇溶液按1∶1混匀制得的TNBS/乙醇混合液的造模效果更优，可成功建立寒热错杂型UC大鼠模型。该模型以中医基础理论为支撑，中医证候与经典UC方法相结合，获得的符合病证结合特点的寒热错杂型UC模型，可为相关实验研究动物模型的建立提供参考，应用于中医药相关干预手段作用研究。值得关注的是，该病证结合动物模型模拟的是寒热错杂型UC，其病机是人体饮食不节、苦寒太过、伤及脾胃，使得脾虚不运、脾阳不升、气机失调，在该动物模型上进行药效评价时应加以辨别。此外，临床实践中在疾病的发展过程中可能出现证型上的相互转化，且中医证候的动物模型不易采集“舌象、脉象”等体征信息及对病灶感受的问诊反馈，病证结合UC动物模型仍需进一步的探索和完善。

Source: 上海中医药杂志. 2024, 58 (08)，基于病证结合特点构建寒热错杂型溃疡性结肠炎大鼠模型的实验研究，DOI：10.16305/j.1007-1334.2024.2311068