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自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型

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一、实验材料

MOG35-55(吉尔生物,51716)

CFA(sigma,F5881)

百日咳素(sigma,P7208)

二、实验方法

1、抗原乳化:1mg/ml的CFA和1mg/ml的MOG35-55混合乳化,利用三通管排出注射器中的空气,冰上来回交替推动活塞30 min,抗原呈完全乳化状态。

(也可使用高速搅拌器,4℃搅拌2min,3-5次)

2、完全乳化的抗原使用1 ml注射器分装,排除内空气后保存于冰上。

3、百日咳素(PTX)的稀释:用1×PBS以1:25稀释PTX至终浓度2ug/ml。

4、小鼠尾静脉(i.v.)注射PTX,100ul/只小鼠 。

5、小鼠气麻后,用酒精棉球消毒小鼠前肢肩胛骨与后扇部位的皮肤,皮下注射MOG35-55抗原乳化液于该四点处,每处50μl。

7、48 h后,每只小鼠再次尾静脉注射100μl PTX。

8、模型诱导首天记为Day 0,每天统计小鼠体重,观察评分 。

评分标准:

评分

临床体征

具体表现

0

无临床症状

正常步态,尾巴可以移动并抬起,如果将鼠标固定在尾巴底部,

尾巴会缠绕在圆形物体上

1

部分软尾

正常步态,尾端下垂

2

瘫痪的尾巴

正常步态,尾巴下垂

3

后肢轻瘫,运动不协调

步态不协调,尾巴跛行,后肢对挤压有反应

4

一条后肢瘫痪

步态不协调,一条后肢拖拉,尾巴跛行,一条后肢对挤压没有反应

5

两条后肢瘫痪

步态不协调,双后肢拖拉,尾巴跛行,双后肢对挤压没有反应

6

后肢瘫痪,前肢无力

步态不协调,前肢用力拉扯身体,前肢在挤压后反射,尾巴跛行

7

后肢瘫痪,前肢瘫痪

老鼠不能移动,一个前肢对脚趾挤压做出反应,尾巴跛行

8

后肢瘫痪,前肢瘫痪

老鼠不能移动,两个前肢对脚趾挤压没有反应,尾巴跛行

9

垂死的

没有动静,呼吸迟缓

10

死亡



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